取冰盒，感受态细胞放入冰浴，溶解后轻甩混匀
将含目的基因的质粒冰浴，加入感受态细胞1μg～ng（1:20）
热激42°C，45s～1min
EP管?μ无抗性LB液体培养基
37°C摇床摇4～6h（变浑浊说明扩增了）
蓝白斑三抗涂板（含庆大霉素、卡那、四环素），?IPTG诱导表达、x-gal诱导，看浑浊程度，?30μ细胞。培养箱孵育。
24h后，长蓝白斑，用枪头挑白斑放入5mLLB有三抗液体培养基，摇床振荡培养12-15h。
第二天早上，离心rpm10min（和提质粒步骤一样）
异丙醇、75%乙醇在-20°C预冷，离心机fasttemp预冷
取S3离心好的上清，1:1?异丙醇，上下翻转混匀，在-20°C沉淀30min以上（bac充分沉淀）
离心10rpm，4°C，30min，弃上清，得到沉淀的杆粒
弃上清，?1mL75%乙醇（漂洗杀菌），涡旋后离心15min
重复第10步。离心后，??在细胞房中??吸干上清，吹30min（杆粒由白色变透明）
制备超纯水：用0.22μ的滤膜?80μdd水
待杆粒透明后，?80μ超纯水溶解，-80°C保存或继续使用。
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